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猪场自制苗流程和要点

点击: 时间:2017-11-14 11:54 作者:伊谢  来源:第一农经 

  这个是猪病防治一个非常冷的东西自制疫苗甚至他的好坏也说不上了,但在很多疾病很行而市场上还有确定免疫效果的商品时候,为了挽救猪场损失。只能自制疫苗来进行免疫。这只能救急不能长期使用。猪场自制疫苗有风险自制需谨慎。

  1自家组织苗制作

  病料选择

  选取患有典型症状且没有用抗生素治疗的病猪,用解剖刀宰杀放血,剖开胸腹部,选取肺脏、脾脏、淋巴结(主要是腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等器官作为主要病料,如果肝脏和肾脏病变较明显,也可选取病变明显部位作为辅助材料,但要尽量保证病料的新鲜,防止其他杂菌污染,以确保组织苗的效果。

  病料匀浆制作与灭活

  将选取的病料放在已灭菌的绞肉机中绞2~3次,并放入冰箱中冷冻,完全冻结的病料取出后溶解,如此反复冻融三遍,再将解冻的病料与生理盐水按1千克:3500-4000毫升的比例进行稀释调兑,之后用双层无菌医用纱布过滤,然后将过了两层纱布的滤液再过两次四层纱布,最后所得滤液中加入0.8%的甲醛,摇匀后,置37℃恒温箱中灭活48小时。灭活期间,每4-6小时摇动一次。

  自制组织苗分装

  分装前按1500国际单位/毫升比例加入双抗(青霉素和链霉素),另外还可加入一定量的黄芪多糖并摇匀,以促进猪只抗体的生成,再移至无菌操作台中无菌分装于100毫升疫苗瓶中,封口后置于2℃-8℃下保存待用。

  2自家病毒苗制作

  用于病毒分离的细胞主要是猪源猪肾细胞系,如PK-15细胞,它可用于分离猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪轮状病毒和猪冠状病毒等。


疫苗

  繁毒用细胞培养

  用无菌洁净移液管往处理过的细胞培养瓶内加入30毫升DMEM营养液。同时用移液管加入5毫升左右的PK-15原代细胞并吹散混匀,置于37℃恒温C02培养箱内48小时,其间于倒置显微镜下观察细胞的生长情况,当细胞贴壁生长规律且无其他杂菌污染时便可进行下一步的细胞传代和放大培养。

  病料处理

  取经PCR或RT-PCR检测为病毒感染阳性的病料约200毫克置于冷冻管内,加入PBS缓冲液匀浆破碎组织病料,然后反复冻融已破碎的组织病料3遍使得组织内感染的病毒释放,12000rpm冷冻离心7分钟并取上清,上清液用灭菌注射器吸人并注入0.22微米孔径滤器过滤,滤液中加入双抗,无菌滤器过滤,此病毒液可直接接上细胞使得病毒生长繁殖。

  病毒增殖及分装

  接毒之前应于超净台内倒掉细胞瓶中的营养液,然后无菌注入含有双抗的病毒液并在37℃下让病毒吸附细胞瓶中的细胞1小时,之后再往已接毒的细胞瓶内无菌加入DMEM营养液约35毫升并于37℃C02培养箱内培养3-5天,之后方可于无菌操作台内无菌分装于100毫升疫苗瓶中,封口后置于2℃-8℃下保存待用。

  3安全性和有效性的检查

  在投入使用之前,必须对生产出来的自家苗进行安全性和免疫性效果的检查。主要是检测疫苗是否灭活彻底,是否确实有效。由于病料中含有的抗原种类很多,临床上只做一些简单的动物试验。

  检测试验主要包括:

  ①安全性检验

  甲醛灭活后的自家苗进行小白鼠腹部注射2毫升,观察24小时;

  ②镜检细菌数量并记录

  在全场注射之前先用一两窝猪仔做预试验,观察2天,看有没发生过敏或注部位发炎的情况。如果没有不良反应,方可全场大规模注射免疫。

第一农经整理)

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tag: 疫苗猪场

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